ปฏิกิริยา PCR ประกอบด้วยกี่ขั้นตอน อะไรบ้าง

เทคนิคปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส (Polymerase Chain Reaction) เป็นเทคโนโลยี ที่ใช้ในการศึกษาทางอณูพันธุศาสตร์ ในการเพิ่มจำนวน ดีเอ็นเอที่ต้องการศึกษาอย่างจำเพาะในหลอดทดลองให้มีจำนวนมากในระยะเวลาอันสั้น โดยอาศัยเครื่องปรับเปลี่ยนอุณหภูมิให้เหมาะสมตาม ขั้นตอนปฏิกิริยา PCR  3 ขั้นตอน

1) Denaturation เป็นขั้นตอนการคลายเกลียวของสายดีเอ็นเอ

2) Annealing เป็นขั้นตอนการจับของ Primer กับสายดีเอ็นเอต้นแบบ

3) Extension เป็นขั้นตอนการสร้างสายดีเอ็นเอสายใหม่ โดยใช้เอนไซม์ DNA polymerase

ทางบริษัท ไบโอแอคทีฟ จำกัด มีผลิตภัณฑ์ เครื่อง Thermal Cycler ประสิทธิภาพสูง

• ความจุ 96 หลุม ของหลอดขนาด 0.2 มิลลิลิตร
• ควบคุมอุณหภูมิได้ในช่วง 0 – 99.9 องศาเซลเซียส
• Uniformity น้อยกว่า ­+0.3 องศาเซลเซียส
• สามารถตั้งค่าอุณหภูมิแบบ Gradient ได้
• หน้าจอของเครื่องเป็นหน้าจอสี มีขนาดใหญ่ไม่น้อยกว่า 7 นิ้ว
• ควบคุมด้วยระบบสัมผัส
• มีระบบ WIFI และสามารถต่อเชื่อมเพื่อควบคุมการทำงานแบบ remote จาก Smart phone ได้

นอกจากนี้ ทางบริษัทฯ ยังมีจำหน่าย เครื่องเพิ่มปริมาณสารพันธุกรรม ชนิด Real-Time PCR คุณภาพสูง จากยุโรป และ สหรัฐอเมริกา โดยมีทีมผู้เชียวชาญด้านเทคนิคคอยให้คำแนะนำรวมไปถึงทีมช่างบริการ (Service Engineer) ที่ให้บริการท่านแบบครบวงจร

ปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส (อังกฤษ: Polymerase chain reaction; ตัวย่อ: PCR) เป็นกระบวนการสังเคราะห์ชิ้นส่วนดีเอ็นเอในหลอดทดลอง ซึ่งกระบวนการนี้เลียนแบบกระบวนการสังเคราะห์ดีเอ็นเอในสิ่งมีชีวิต ผู้คิดค้นเทคนิคพีซีอาร์ คือ Kary Mullis พีซีอาร์ประกอบไปด้วยขั้นตอนต่าง ๆ ดังต่อไปนี้

การแยกสายดีเอ็นเอเกลียวคู่ออกจากกัน (Denaturation) ใช้อุณหภูมิ ประมาณ 94 องศาเซลเซียส เมื่อเริ่มต้นดีเอ็นเอแม่แบบ จะอยู่ในลักษณะที่เป็นเกลียวคู่ เมื่อเพิ่มอุณหภูมิถึงประมาณ 94 องศาเซลเซียส จะทำให้พันธะไฮโดรเจนระหว่างคู่เบสของดีเอ็นเอถูกทำลาย ทำให้เส้นดีเอ็นเอแยกออกจากกัน โดยขั้นตอนนี้จะแตกต่างจากการสังเคราะห์ดีเอ็นเอในธรรมชาติ คือ ในสิ่งมีชีวิติจะมีเอนไซม์เฮลิเคส (Helicase) ช่วยในการแยกสายและคลายเกลียวดีเอ็นเอ
การจับของไพร์เมอร์กับดีเอ็นเอแม่แบบ (Annealing) ใช้อุณหภูมิประมาณ 40-62 องศาเซลเซียส เมื่อแยกสายดีเอ็นเอออกจากกันแล้ว จะลดอุณหภูมิลงเหลือ 40-62 องศาเซลเซียส เพื่อให้ดีเอ็นเอสังเคราะห์ขนาดสั้นประมาณ 15-25 เบส ที่เรียกว่า ไพร์เมอร์ (Primer) เข้ามาจับบริเวณที่มีลำดับเบสคู่สมกัน ในการสังเคราะห์ดีเอ็นเอ ไม่สามารถที่จะเริ่มจากศูนย์ได้เนื่องจากเอ็นไซม์ดีเอ็นเอพอลิเมอร์เรส (DNA polymerase) ต้องการปลาย-OH ทางด้าน 3'เพื่อนำ นิวคลีโอไทด์ตัวต่อมาต่อ ซึ่งในสิ่งมีชีวิตจะมีเอ็นไซม์ที่มีชื่อว่า ไพรเมส (Primase) เป็นตัวสร้างอาร์เอ็นเอไพรเมอร์ขึ้น
การสังเคราะห์ดีเอ็นเอสายใหม่ต่อจากไพรเมอร์ (Extension) ใช้อุณหภูมิ ประมาณ 68-72 องศาเซลเซียส ในขั้นตอนนี้จะเป็นการสร้างสายดีเอ็นเอต่อจากไพร์เมอร์ โดยอุณหภูมิที่ใช้จะพอเหมาะกับ การทำงานของ Taq DNA polymerase

องค์ประกอบที่สำคัญในการทำ PCR ได้แก่

-ดีเอ็นเอแม่แบบ (Template DNA)
-ไพรเมอร์ Primer
-เอ็นไซม์DNA Polymerase ชนิดทนความร้อน (Taq DNA polymerase)
-Deoxy nucleotide triphosphate(dNTP)
-บัฟเฟอร์สำหรับเอ็นไซม์ดีเอ็นเอพอลิเมอเรส (PCR Buffer)
-แมกนีเซียมคลอไรด์(MgCl2)
-เครื่องมือที่สำคัญในการทำพีซีอาร์ได้แก่ Thermal cycler หรือ PCR machine

ข้อมูลจากวิกิพีเดีย สารานุกรมเสรี

 (Ref:https://www.youtube.com/watch?v=iQsu3Kz9NYo)

��������� ����ö�������������ѹ��������

������

෤�Ԥ Polymerase Chain Reaction (PCR)

��ѡ��âͧ PCR

����������������ͧ���ԡ����� PCR

1.  Deoxynucleotides (dNTPs) ����Ǥ����䷴� �����˹�����������Ѻ����ѧ��������������������
2.  DNA polymerase ���͹�������Ѻ�ѧ�������������������������ԡ���������������Ǥ����䷴�������ҡѺ�������
3.  Primer ���������������������� � ��������Ѻ����������Ѻ��������������Ẻ�ͧ����ѧ������ ������ PCR �֧��ͧ��Һ���Ѻ���ͧ������������ͧ����������ӹǹ �������������ҧ����������
4.  PCR buffer ��������������Ǻ���������ͧ�������ԡ��������������� �� pH ���������ҧ � �������ͧ��͹������������� (Mg++) ��������
5.  Template ������������Ẻ�����չ��ǹ�����ͧ�����������ҳ ������������ҧ������� �����ͧ���������Ǩ��������������

����ͧ��������ҳ������� (PCR machine)

���������������Ե��������ҡ��ԡ����� PCR

����ª���ͧ PCR ������Ǩ�ԹԨ����ä